DMEM培养基的制备方法
概述：
DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）培养基是最常见的细胞培养基之一，适用于大多数哺乳动物细胞的培养。它包含氨基酸、糖类、维生素、矿物质、足量的胰岛素、转铁蛋白、纤维素和胆固醇等成分，是维持细胞生长、增殖和分化所必需的营养基质。
步骤一：准备培养基成分
材料：
- DMEM粉末（500mL）
- 无菌去离子水（500mL）
- 合适的无菌容器
操作：
- 取出所需量的DMEM粉末，并通过筛网过滤。
- 使用无菌去离子水加入到粉末中，搅拌使之完全溶解。
- 调节pH至7.4，使用0.22μm的无菌滤器过滤DMEM。
- 分装至无菌容器中，如培养瓶、离心管等，储存于4℃下。
步骤二：增加培养基成分
材料：
- 10%无菌胎牛血清（FBS）或其他合适的血清
- 1%无菌L-谷氨酸
- 1%无菌青霉素-链霉素（Pen-Strep）
- 去L-谷氨酸的DMEM培养基
- 合适的无菌容器
操作：
- 使用无菌技术将10%FBS加入DMEM中，得到最终浓度为10%的DMEM。
- 加入1%无菌L-谷氨酸，调节pH至7.2~7.4。
- 加入1%无菌Pen-Strep，充分混合均匀。
- 过0.22μm滤器，将培养基分装入无菌容器，并在4℃下储存。
步骤三：气氛调节
材料：
- 5%二氧化碳（CO2）/95%空气混合气体
- 离心管
- 培养基
操作：
- 使用离心管，加入适量的培养基。
- 调节气氛仪至5% CO2，并通过密闭培养箱等设备使气氛稳定。
- 将加有DMEM的离心管放入培养箱中，恢复至体外温度。
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DMEM培养基是最常见的细胞培养基之一，制备方法简单易操作，可应用于多种哺乳动物细胞的培养。合理增加成分比例，调节气氛开展细胞培养实验，对于细胞存活、增殖和分化的研究具有重要意义。
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